Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的处理过程中逐渐扩展

从第一次显现去甲自身免疫球蛋白到显现1M-高血压诊疗副作用的成果率在儿童时期就有很好的刻画，多个去甲自身免疫球蛋白中性的儿童中的有70%在血清转化后10年内患有高血压，而随访15年的儿童这一百分比减少到84%。相较之下，占多数诊疗1M-高血压一半以上的M-1M-高血压的病症程序还没有想得到充分的研究课题。

越来越多的人开始采行分期系统来定义1M-高血压的成果：族裔在显现多种去甲自身免疫球蛋白时带入第1下一阶段，显现血糖持续性时带入第2下一阶段，显现副作用时带入第3下一阶段。一些多发去甲自身免疫球蛋白中性的族裔，在1期和2期，成果速度快，并发展为病症的1M-高血压。我们之后刻画了一组成员在首次检查到多种去甲自身免疫球蛋白结果显示后至不及10年无高血压的极很慢成果者，这组成员患儿总数不及，但特点非常明确。随后，我们发现去甲自身淋巴细胞特异性CD8+T巨噬细胞质子化该在成果比较很慢的患儿中的基本不存在，但在最近病症和长期存在的高血压患儿中的很容易检查到。这或许确实，与成果患儿相较，这些患儿自身免疫质子化该的恒定减慢。

早期研究课题确实，尽管恒定性T巨噬细胞(Treg)百分比也就是说，但高血压患儿存在一些功能缺点，其中的有数对IL-2的质子化该能力也降低。此外，高血压患儿中的的畸变CD4+T巨噬细胞或许对恒定愈来愈具抵抗性，显出为畸变T巨噬细胞的消除减慢，大自然诱发的Treg和本体外诱发的作用于Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T巨噬细胞中的IL-2质子化该减慢。本研究课题的目地是刻画了CD4+恒定性T巨噬细胞(Treg)在大群极比较很慢成果者中的的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以一些人辅以的垂直研究课题，在21岁表列出肺炎的患儿家庭成员中的检查1M-高血压的危险状况。我们之后刻画了长期比较很慢成果者的特点，他们保持良好多重去甲自身免疫球蛋白中性超过10年，但没有显现高血压的诊疗副作用，很慢性或非顺利癫痫自身免疫。随后，10名继续保持良好无高血压并希望提供大量血液结果显示的比较很慢成果者纳入T和B巨噬细胞功能比对。在迄今为止的研究课题中的，8名很慢成果者(SP组成员)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身免疫球蛋白中性。所有的参加者都始终保持良好1M-高血压成果的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身免疫球蛋白对某些淋巴细胞的中性质子化该，然而，一名患儿从未始终保持良好2期至不及6年，但没有显现诊疗副作用，一名患儿被诊断为高血压，该测试者72岁，在采集实验结果显示时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中的对该遗传物质顺利进行了直接评量。除去外周血单个连锁反应巨噬细胞(PBMCs)，采行多数值流式巨噬细胞奥义和T巨噬细胞消除试验中评量遗传物质中的Treg的频带、表M-和功能。采行FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和转回)顺利进行无监理聚类比对，评量Treg表M-。

结果：与生已逝品质遗传物质相较，来自很慢成果本体的遗忘CD4+T巨噬细胞的监理聚类推测，激已逝的遗忘CD4+ Treg频带减少，与低剂量作用于的TNFR相关蛋白(GITR)传达减少有关。一名HbA1c增高的患儿与成果比较很慢者和归一化的小鼠相较，Treg谱有所完全相同。功能比对确实，与生已逝品质遗传物质相较，来自比较很慢成果本体的Treg介导的CD4+畸变T巨噬细胞消除轻微毁损。显出为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134传达的消除减少。

左图1 深入的表M-比对推测，CD4+Treg亚M-在很慢成果配置文件中的减少。由FlowSOM转换成的Treg室，汇聚在来自所有遗传物质的已逝CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标有物传达比对出10个元簇:遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)采行9个完全相同Treg标有转换成的10个元簇的MST。每个节点代表一个坦克部队(100个坦克部队)，愈来愈多的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点组成员周围上色。每个节点中的的饼左图指出单个标有的传达级别。(b)每个元聚类的热左图，以推测整本体标有传达。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转换成左图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较总质量为每个metacluster盒支线左图(总质量> 0.05%)已确定为HD和SP组成员:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T巨噬细胞(l)。橙色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检测。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 采行CITRUS的预测模M-证实，Treg频带的减少是成果比较很慢的标志。分级相关联(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP参加者和归一化的HD参加者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的近现代左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利进行除去，实时FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及遗传物质SP 606(橙色)中的CD25+ cd127的频带汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联偏序的盒支线左图;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)玉米簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头醒目地簇被标识为SP和HD配置文件之间的完全相同。(j)盒支线左图推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员中的，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相较总质量(百分比)。(k)直方左图推测每个簇的表M-(粉红色)和Treg标有相较传达与背景传达(橙色);上列，文件系统Treg_3;上面正要，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇中的标有的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检测

左图3 与生已逝品质献血者相较，成果比较很慢者遗忘treg的GITR减少。每个遗忘CD4+T巨噬细胞元簇(遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个传达标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的传达热左图(sp606不有数在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR传达串接，推测直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon一对一符号秩和检测，p< 0.07(橙色)所有遗传物质有数，p< 0.05(橙色)遗传物质SP 606和归一化的HD不有数在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR传达，从分级相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橙色)串接，推测直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩检测

左图4 来自比较很慢成果的CD4+ treg巨噬细胞控制畸变CD4+T巨噬细胞的能力也降低。SP组成员用橙色的支线和白点指出，HD组成员用金色的支线和白点指出，橙色的支线/白点指出遗传物质sp606。采行CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(应该答者)被标有为CFSE, Treg按检视的百分比反应物。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培植3天后顺利进行流式巨噬细胞奥义检查。(a-d)与CD4+应该答者相较应该的treg培植(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应该答者培植。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。采行中性对照(激已逝的积极响应该巨噬细胞不含treg)测算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 畸变CD4+T巨噬细胞对比较很慢成果的T巨噬细胞再生的消除愈来愈尖锐。SP组成员用橙色的支线和白点指出，HD组成员用金色的支线和白点指出，橙色的支线/白点指出遗传物质sp606。采行CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(应该答者)被cfsel标有，treg按检视的百分比反应物。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培植3天后顺利进行流式巨噬细胞奥义(CD25反染)和巨噬生长因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606应该答者一同培植。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE消除前年(b)。(c,d) CD25消除前年(c)和CD134消除前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中的的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们事实的事实是，来自比较很慢成果子的再生遗忘CD4+Treg在GITR传达中的想得到了扩展和丰富，凸显了进一步研究课题Treg在1M-高血压安全性族裔中的的异质性的必要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28