Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐引入

从第一次显现出胰脏自身抗质到显现出1型式哮喘诊疗症状的的其发展部将在老年人时期就有很好的所述，多个胰脏自身抗质无症状的老年人中会有70%在血清类比后10年内患上哮喘，而随访15年的老年人这一比部将减较少到84%。比起之下，占有诊疗1型式哮喘一半以上的型式1型式哮喘的肺癌机制还没想得到充分的数据统计分析。

越来越多的人开始用到仍须系统设计来定义1型式哮喘的的其发展：群质在显现出多种胰脏自身抗质时重回第1下一阶段，显现出皮质醇异常时重回第2下一阶段，显现出症状时重回第3下一阶段。一些多发胰脏自身抗质无症状的群质，在1期和2期，的其发展较来得慢，并其发展为肺癌的1型式哮喘。我们此前所述了组合成成员在首次检验到多种胰脏自身抗质比对后至较少10年无哮喘的想像中来得慢的其发展者，这组成员病患者人数较少，但基本特征颇为恰当。随后，我们发现胰脏自身淋巴细胞甲基化CD8+T细胞会反应在的其发展减来得慢的病患者中会基本不存在，但在近期肺癌和长期存在的哮喘病患者中会很较易检验到。这意味著说明了，与的其发展病患者比起，这些病患者性疾病反应的缓冲大幅提高。

现代数据于数，尽管缓冲性T细胞会(Treg)数量正常，但哮喘病患者存在一些系统设计原因，其中会包含对IL-2的反应能力增大。此外，哮喘病患者中会的畸变CD4+T细胞会意味著对缓冲增添抵抗性，表现为畸变T细胞会的诱导弱化，自然现象消除的Treg和质外消除的诱发Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T细胞会中会IL-2反应弱化。本数据统计分析的目的是所述了CD4+缓冲性T细胞会(Treg)在一小群想像中减来得慢的其发展者中会的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

分析方法：BOX数据统计分析是一项以老年人蓝本的纵向数据统计分析，在21岁以下肺炎的病患者亲属中会检查1型式哮喘的有可能考量。我们此前所述了长期减来得慢的其发展者的基本特征，他们始终保持多重胰脏自身抗质无症状至较少10年，但没显现出哮喘的诊疗症状，来得慢性或非受累性疾病。随后，10名在此之后始终保持无哮喘并希望备有大量血液比对的减来得慢的其发展者纳入T和B细胞会系统设计统计分析。在现在的数据统计分析中会，8名来得慢的其发展者(SP组成员)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的胰脏自身抗质无症状。所有的行动者都东南面1型式哮喘的其发展的1期，尽管一些人随后挽回了胰脏自身抗质对某些淋巴细胞的无症状反应，然而，一名病患者并未东南面2期至较少6年，但没显现出诊疗症状，一名病患者被诊疗为哮喘，该受试者72岁，在采集实验比对时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中会对该小分子开展了单独检验。受控外周血单个核细胞会(PBMCs)，引入多参数流式细胞会法术和T细胞会诱导试验车检验小分子中会Treg的频部将、表型式和系统设计。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、也就是说和紧接著)开展无监督聚类统计分析，检验Treg表型式。

结果：与心理健康小分子比起，来自来得慢的其发展质的无意识CD4+T细胞会的监督聚类说明了，转录的无意识CD4+ Treg频部将减较少，与糖皮质激素诱发的TNFR关的蛋白质(GITR)传达减较少有关。一名HbA1c下降时的病患者与的其发展减来得慢者和最简单的相异组成员比起，Treg谱有所不同。系统设计于数，与心理健康小分子比起，来自减来得慢的其发展质的Treg特异性的CD4+畸变T细胞会诱导明显损害。表现为对畸变CD4+T细胞会CD25和CD134传达的诱导减较少。

平面图1 险恶的表型式于数，CD4+Treg亚型式在来得慢的其发展队列中会减较少。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上面物传达鉴定出10个元簇:无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)用到9个不同Treg上面转化成的10个元簇的MST。每个节点都有一个坦克部队(100个坦克部队)，颇为大的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点组成员周围上色。每个节点中会的饼平面图声称单个上面的传达高至。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整质上面传达。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转化成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的表层。(e-l)相对于轻元素为每个metacluster装有终点站平面图(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞会(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞会(l)。橘色圆点都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用到CITRUS的预报证实，Treg频部将的减较少是的其发展减来得慢的标志。分级门控(a - f)和葡萄统计分析(g-k)来得SP行动者和最简单的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞会上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的都有性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR传达开展受控，模拟FlowSOM群质。(b) HD(黑斑)和SP(虎纹)组成员以及小分子SP 606(橘色)中会CD25+ cd127的频部将概要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的装有终点站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度纹理，上标值得注意的簇被识别为SP和HD队列相互间的不同。(j)装有终点站平面图说明了了在SP(虎纹)和HD(灰点)组成员中会，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于轻元素(比部将)。(k)直方平面图说明了每个簇的表型式(粉红色)和Treg上面相对于传达与故事情节传达(蓝色);上列，线程Treg_3;下面一行，线程Treg_4。故事情节与所有其他簇中会上面的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验

平面图3 与心理健康献血者比起，的其发展减来得慢者无意识treg的GITR减较少。每个无意识CD4+T细胞会元簇(无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个传达上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热平面图(sp606不包含在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中会所有HD(红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了直方平面图(c)和概要平面图(d)。Wilcoxon分组符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有小分子包含，p< 0.05(蓝色)小分子SP 606和最简单的HD不包含在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR传达，从分级门控，从所有HD(红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)串联，说明了直方平面图(e)和概要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩检验

平面图4 来自减来得慢的其发展的CD4+ treg细胞会控制畸变CD4+T细胞会的能力增大。SP组成员用蓝色的终点站和圆点声称，HD组成员用黄色的终点站和圆点声称，橘色的终点站/圆点声称小分子sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被上面为CFSE, Treg按观察的比部将滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞会，培养3当晚开展流式细胞会法术检验。(a-d)与CD4+反之亦然者相对于应的treg培养(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培养。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE诱导比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导比例。用到无症状相异(转录的拥护细胞会分别为treg)计算诱导比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

平面图5 畸变CD4+T细胞会对减来得慢的其发展的T细胞会再生的诱导更敏感。SP组成员用蓝色的终点站和圆点声称，HD组成员用黄色的终点站和圆点声称，橘色的终点站/圆点声称小分子sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel上面，treg按观察的比部将滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞会，培养3当晚开展流式细胞会法术(CD25反染)和细胞会因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培养。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE诱导百分部将(b)。(c,d) CD25诱导百分部将(c)和CD134诱导百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中会的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

推论：我们得出的推论是，来自减来得慢的其发展子的再生无意识CD4+Treg在GITR传达中会想得到了扩展和丰富，强调了进一步数据统计分析Treg在1型式哮喘效用群质中会的异质性的必要性。

注解来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28